尿CartiLaps酶联免疫试剂盒(Urine CartiLaps? ELISA Kit) 只用于研究，不用于诊断。
北欧生命科学诊断产品有限公司(Nordic Bioscience Diagnostics A/S)对将试剂盒用于除上 面指定用途以外的任何其他用途的后果不予负责。对未按照本手册所示方法而错误使用本试剂盒不予负责。
此外，北欧生命科学诊断产品有限公司对由使用者或第三方根据尿 CartiLaps? ELISA 的结果 给出的诊断或结论的不予负责，亦对其解释导致的任何后果不予负责。

Nordic Bioscience Diagnostics A/S
Herlev Hovedgade 207
DK-2730 Herlev
Denmark

1104A

CE

简介

用途
尿CartiLaps酶联免疫试剂盒(Urine CartiLaps? ELISA Kit)检测人尿中II型胶原C端肽(CTX-II)降解产物。该试剂盒只用于研究，不用于诊断。

局限
本测试未建立在确定软骨损伤水平的基础上。

背景介绍
软骨完整结构的损伤是骨关节炎和类风湿关节炎的主要组织学表现。II型胶原蛋白是软骨的主要有机成分。软骨降解后，II型胶原蛋白的片段(CTX-II)释放进入循环，随后排入尿中。 尿中的CTX-II 片段可由尿CartiLaps? ELISA定量检测。
据报道，尿CartiLaps? ELISA 在预测骨关节炎的发展(Reijman 2003, Garnero 2003) 及在其它临床和临床前的调查中(见参考文献) 被使用。

检测原理
尿CartiLaps? ELISA (Christgau 2001)是基于一单克隆抗体对尿II型胶原片段，或对由生物素 标记并结合于微孔板中链霉抗生物素蛋白的合成短肽的竞争性结合。
首先，生物素标记的合成短肽结合于包被有链霉抗生物素蛋白的微孔的表面。洗涤之后，加入标准、参比和尿样，然后加入单克隆抗体溶液。再次洗涤，并加入过氧化物酶加合的兔抗鼠免疫球蛋白。第三次洗涤之后，加入生色底物，用硫酸终止显色反应并测定吸光度。

注意事项

实验室中应注意以下事项：
? 不要在操作免疫诊断试剂室内吃、喝、吸烟或使用化妆用品。
? 不要用口吸取试剂。
? 操作免疫诊断试剂时应带手套。
? 只用干净仪器。

注意
只用于体外检测
? 所有试剂和实验室设备应按感染物品处理和丢弃。
? 试剂盒应在有效期限之内使用，不要将不同批号的试剂混合。

试剂存放
收到尿CartiLaps? ELISA试剂盒后将其存放在2一8°C。试剂盒在此条件下稳定至包装盒上所 标有效日期。

材料及试剂

采样
建议取第二次晨尿。尿样在4°C稳定24小时，长期储存应在低于-18°C冷冻存放。尿样至少 稳定10 个冻融周期。
用前尿样应震荡并沉淀至少30 分钟。

提供的材料及试剂
使用试剂盒前，请阅读注意事项。
本试剂盒提供足够96个标本的测试试剂。

包被有链霉抗生物素蛋白(Streptavidin) 的微孔板 (MTP)
条形微孔板(12 条 x 8 管) 涂有链霉抗生物素蛋白 ，并置于一塑料框架中。

尿CartiLaps?标准A(瓶A)
一瓶(至少3.0 mL)可直接使用的含有蛋白质稳定剂、去污剂和防腐剂的TRIS缓冲溶液。

尿CartiLaps?标准B一标准F (瓶B一瓶F)
五瓶(至少0.5mL/瓶)可直接使用的合成短肽(溶于含有蛋白质稳定剂、去污剂和防腐剂的TRIS缓冲溶液)。合成短肽的准确浓度标在瓶上。

尿CartiLaps?参比CO (瓶CO)
一瓶(至少0.5mL)可直接使用的合成短肽(溶于含有蛋白质稳定剂、去污剂和防腐剂的TRIS 缓冲溶液)。

生物素标记的尿CartiLaps?抗原 (1号瓶)
一瓶(至少12.0mL)生物素标记的可直接使用的合成短肽(溶于含蛋白质稳定剂、去污剂和防腐剂的磷酸缓冲盐溶液)。

第一抗体(2号瓶)
一瓶(至少12.0mL)可直接使用的单克隆抗体(溶于含蛋白质稳定剂、去污剂、防腐剂和红色染料的TRIS缓冲溶液)。

过氧化物酶加合抗体 (3号瓶)
一瓶(至少12.0mL)过氧化物酶加合的兔抗鼠免疫球蛋白(溶于含蛋白质稳定剂、去污剂、防腐剂和蓝色染料的TRIS缓冲溶液)。

底物溶液 (瓶TMB)
一瓶( 至少12.0mL)可直接使用的四甲基联苯胺(TMB)底物(溶于酸性缓冲溶液)。
请注意该生色底物可带浅蓝色。

终止液 (瓶ST)
一瓶( 至少12.0mL)可直接使用的0.18 mol/L硫酸溶液。

洗涤溶液 (瓶W)
一瓶(至少20.0mL)含有去污剂和防腐剂的浓缩洗涤缓冲溶液。

密封薄膜
温育时用粘性密封薄膜密封。

所需的仪器及试剂(未提供)
? 盛装抗体混合溶液和洗涤溶液的容器。
? 准确移取40微升的微量移液器
? 准确移取100微升的8孔或12孔微量移液器
? 蒸馏水
? 2一8°C冰箱
? 450nm和650nm微孔板读数仪

实验步骤

按照下面说明所示进行实验对最佳完成实验非常重要。在使用之前，平衡所有溶液至室温。确定分析用微孔板所需数量。建议每一标本测试两份。另外，每轮实验共需要14孔用于标准A一标准F和参比CO。将适当的数量的微孔板置于塑料框架上。将未使用的微孔板与干燥剂一起密封于锡箔袋中。

实验步骤
1. 预温育
移取100微升生物素标记的尿CartiLaps?抗原(1号瓶)加入各微孔板，用粘性密封薄膜密 封微孔板，在室温(18?22°C)温育30±5分钟，不要震荡混合。

2. 洗涤
洗涤缓冲溶液(瓶W)以1体积浓缩缓冲溶液+50体积蒸馏水的比例稀释。手工洗涤微孔板5次。使用自动洗涤器，请参照产品说明或实验室指南。通常洗涤5次。确保每次手工或自动洗涤器洗涤后将微孔中的溶液倒空干净。

3. 第一抗体温育
移取40微升尿CartiLaps?标准B一标准F(瓶A?瓶F)，参比CO(瓶CO)或待测标本于微孔中，加入100微升第一抗体(2号瓶)。用粘性密封薄膜密封微孔板，在冰箱中(2?8°C)温育21±2小时。不要震荡。

4. 洗涤
见第2步。

5. 第二抗体温育
向各孔加入100微升过氧化物酶加合抗体溶液(3号瓶)。用粘性密封薄膜密封微孔板，在室温(18?22°C)温育60±5分钟。不要震荡。

6. 洗涤
见第2步。

7. 与生色底物温育
向各孔加入100微升底物溶液(瓶TMB)，用粘性密封薄膜密封，在避光和18-22°C温育15 ± 2分钟。不要震荡。

8. 终止显色反应
向各孔加入100微升终止溶液(瓶ST)。

6. 测定吸光度
在450 nm 测定各孔吸光度，用650 nm吸光度作参比。应在二个小时之内测定。

标本检测范围
如果待测标本的吸光度低于标准F, 建议用标准A稀释标本。

质量控制

合格实验室操作(GLP)要求在每轮实验中使用参比CO以检测实验操作质量。参比CO应以待测标本对待，结果用适当的统计方法分析。

结果的计算
可用四参数对数曲线的拟合做一标准曲线，用内推法确定参比CO和待测标本中尿CartiLaps?的浓度。

结果举例