尿CrossLaps?酶联免疫试剂盒(Serum CrossLaps? ELISA Kit)只用于体外。
北欧生命科学诊断产品有限公司(Nordic Bioscience Diagnostics A/S)对将试剂盒用于除上 面指定用途以外的任何其他用途的后果不予负责。对未按照本手册所示方法而错误使用本试剂盒不予负责。

Nordic Bioscience Diagnostics A/S
Herlev Hovedgade 207
DK-2730 Herlev
Denmark

1104A

CE
简介

用途
尿CrossLaps?酶联免疫试剂盒(Urine CrossLaps? ELISA Kit)用酶联免疫法定量测定人 尿中I型胶原C端肽(CTX-I)降解产物。
尿CrossLaps?酶联免疫试剂盒可用于人骨吸收的体外诊断，并有助于

A. 监测骨吸收在以下情况下的变化
1) 绝经妇女抗骨吸收治疗
a)用激素和类激素药物进行激素替代疗法(HRT)
b) 二膦酸盐治疗

2)抗骨吸收疗法在个体被诊断为骨量减少
a)用激素和类激素药物进行激素替代疗法(HRT)
b) 二膦酸盐治疗

B. 预测绝经妇女在接受抗骨吸收疗法情况下的骨矿物密度(BMD)应答
a)用激素和类激素药物进行激素替代疗法(HRT)
b) 二膦酸盐治疗

局限
检测的用途未建立在用于预测骨质疏松的发展或未来骨裂的危险，未建立在用于监测副甲状腺机能亢进或甲状腺机能亢进。当用于监测治疗时，若患者承受影响骨吸收的病痛如骨转移，副甲状腺机能亢进或甲状腺机能亢进时，结果会令人迷惑。
尿CrossLaps? ELISA检测结果应该与临床研究结果和其它诊断结果一道使用，不应 用作单一测定方式起始或改变治疗。
不要互相换算血清CrossLaps? ELISA和尿CrossLaps? ELISA的测定值。

检测的总结和解释
I型胶原蛋白占骨中有机基质90%以上，并在骨中合成(Ref.1)。骨骼更新时，I型胶原被降解，短肽片段进入尿液。这些片段可用尿CrossLaps? ELISA检测，并有文献报道可将此分析 用于患骨代谢疾病的病人抗骨吸收治疗的研究(Ref.2一17) 。

检测原理
尿CrossLaps?ELISA是基于抗CrossLaps?抗体对可溶性CrossLaps?抗原，或对包被于微孔中的CrossLaps?抗原的竞争性结合。标准标本、参比CO和待测标本加入微孔板中，再加入抗CrossLaps?抗体，18一22°C温育一小时。洗涤微孔板，加入过氧化物酶加合抗兔抗体，18一22°C再温育一小时。第二次洗涤微孔板后，与生色底物温育15分钟，终止显色反应，测量吸光度。

注意事项

实验室中应注意以下事项：
? 不要在操作免疫诊断试剂室内吃、喝、吸烟或使用化妆用品。
? 不要用口吸取试剂。
? 操作免疫诊断试剂时应带手套。实验完毕将手洗干净。
? 用一次性吸水纸覆盖操作台。

注意
只用于体外检测
? 所有试剂和实验室设备应按感染物品处理丢弃。
? 试剂盒应在有效期限之内使用，不要将不同批号的试剂混合。

试剂存放
收到尿CrossLaps? ELISA试剂盒后将其存放在2一8°C。试剂盒在此条件下稳定至包装盒上 所标有效日期。

材料及试剂

采样
用尿CrossLaps? ELISA测定尿中CTX-I的水平不随饮食摄入量变化，然而为保持一致，建议 用第二次晨尿。并且对每一患者，后续标本的取样应和基线标本取样情况相同(即第二次晨尿 ) 。
请注意为取得最佳结果，建议将标本离心(如2000g，10分钟)。冷藏保存尿样(2一8°C)应不超过一星期，冷冻标本(<-18°C)可保存较长时间。
若标本明显被全血污染可干扰标本分析。这些标本应丢弃并重新取样。

提供的材料及试剂
打开试剂盒前，请阅读注意事项。本试剂盒提供足够96个标本的测试试剂。

微孔板
包被有CrossLaps? 抗原的6条微孔板(2 x 8 孔/每条)置于一塑料框架中。
CrossLaps?标准A(瓶A)
一瓶(11 mL)可直接使用的含有蛋白质稳定剂、去污剂和防腐剂的缓冲溶液。
CrossLaps?标准B一标准F (瓶B一瓶F)
五瓶(0.3mL/瓶)可直接使用的CrossLaps?标准标本(溶于含有蛋白质稳定剂、去污剂和防腐剂的缓冲溶液)。
尿参比CO (瓶CO)
一瓶(0.5mL)可直接使用的人尿标本(溶于含有蛋白质稳定剂、去污剂和防腐剂的缓冲溶液)。准确浓度标在瓶上。
第一抗体溶液(1号瓶)
一瓶(12mL)可直接使用的兔抗CrossLaps?抗体(溶于含蛋白质稳定剂、去污剂和防腐剂的缓冲溶液)。
过氧化物酶加合抗体 (2号瓶)
一瓶(12mL)可直接使用的过氧化物酶加合的抗兔抗体(溶于含蛋白质稳定剂、去污剂和防腐剂的缓冲溶液)。
底物溶液 (瓶TMB)
一瓶( 12mL)可直接使用的四甲基联苯胺(TMB)底物(溶于酸性缓冲溶液)。
请注意该生色底物可带浅蓝色。
终止液 (瓶ST)
一瓶( 至少12mL)可直接使用的0.18 mol/L硫酸溶液。
洗涤溶液 (瓶W)
一瓶(20mL)含有去污剂和防腐剂的浓缩洗涤缓冲溶液。用前1+50的比例稀释。
密封薄膜
温育时用粘性密封薄膜密封微孔板。
所需的仪器及试剂(未提供)
? 盛装洗涤溶液的容器。
? 准确移取15微升的微量移液器
? 蒸馏水
? 准确移取100微升的8孔微量移液器
? 微孔板混合振动装置(300rpm)
? 微孔板读数仪

实验步骤

实验步骤
按照下面说明所示进行实验对最佳完成实验非常重要。在使用之前，平衡所有溶液至室温。实验在18?22°C进行。

确定分析用微孔板所需数量。建议每一标本测试两份。另外，每轮实验共需要14管用于标准A一标准F和参比CO。将所需微孔板置于塑料框架上。将未使用的微孔板与干燥剂一起密封于锡箔袋中。

1. 加入标准，参比和待测标本
移取15微升标准B一标准F(瓶A?瓶F)，参比CO(瓶CO)或待测标本于微孔板中。

2. 温育微孔板
向各管加入100微升第一抗体(1号瓶)。用粘性密封薄膜密封微孔板，在18?22°C，以 300rpm 在一混合震荡器上温育60±5分钟。

3. 洗涤
洗涤缓冲溶液(瓶W)以1+50的比例稀释。手工洗涤微孔板5次。
使用自动洗涤器，请参照产品说明或实验室指南。通常洗涤3?5次。确保每次手工或自动洗涤器洗涤后微孔板中的溶液倒空干净。

4. 与过氧化物酶加合抗体温育
向各孔加入100微升过氧化物酶加合抗体溶液(2号瓶)。用粘性密封薄膜密封微孔板，在18?22°C，以300rpm在一混合震荡器上温育60±5分钟。

5. 洗涤
见第3步。

6. 与生色底物温育
向各孔加入100微升底物溶液(瓶TMB)，用粘性密封薄膜密封，在避光、18?22°C和300rpm混合震荡的条件下温育15 ± 2分钟。
不要直接从盛TMB底物的小瓶吸取，将所需体积的TMB移入一干净容器使用。剩余底物应丢弃，不要倒回TMB 瓶中。

7. 终止显色反应
向各孔加入100 微升终止溶液(瓶ST)。

8. 测定吸光度
在450 nm 测定各孔吸光度，用650 nm吸光度作参比。应在二个小时之内测定。

标本检测范围
如果待测标本的吸光度低于标准F, 应该用标准A稀释标本并重新分析。

质量控制

合格实验室操作(GLP)要求在每轮实验中使用参比CO以检测实验操作质量。参比CO应以待测标本对待，结果用适当的统计方法分析。

结果

结果的计算
? 计算每一标本两个吸光度的平均值，画出六个标准标本A一F的吸光度对相应CrossLaps?浓度的标准曲线。。也可使用四参数对数曲线的拟合。
? 用内推法确定参比CO和待测标本中CrossLaps?的浓度